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過氯化氫酶定性實(shí)驗(yàn)過程及操作方法--氯化氫
1．取4支干凈的試管，按a b c對照編號。放在試管架上備用。氯化氫
2．在A B C試管內(nèi)分別加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在A和B試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對照管內(nèi)加15 ml蒸餾水。
3．在A B C 及對照管中分別加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做預(yù)備實(shí)驗(yàn)時根據(jù)樣品中淀粉酶含量多少而定)，迅速搖勻并記下反應(yīng)的初始時間。
4．在上述4個管內(nèi)分別加若干滴碘液(碘液用量在預(yù)備實(shí)驗(yàn)時酌定)，迅速搖勻，這時各管均呈藍(lán)色。
5．觀察結(jié)果。注意各管的變化，記下各管藍(lán)色完全消失時的時間(即淀粉酶和淀粉反應(yīng)完全的時間)，并對結(jié)果進(jìn)行分析。
(二)細(xì)菌淀粉酶在固體培養(yǎng)基中的擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
1．將肉膏胨淀粉瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，待冷至45℃左右倒人無菌培養(yǎng)皿內(nèi)(每皿約10 ml)，共倒3個，靜置待冷凝即成平板。
2．在無菌操作條件下，用接種環(huán)分別挑取枯草桿菌、大腸桿菌和活性污泥各一環(huán)分別在3個平板上點(diǎn)種5個點(diǎn)。倒置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24～48 h。
3．觀察結(jié)果，取出平板，分別在3個平板內(nèi)菌落周圍滴加碘液，觀察菌落周圍顏色的變化。若在菌落周圍有一個無色的透明圈，說明該細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶并擴(kuò)散到基質(zhì)中去。若菌落周圍仍為藍(lán)色，說明該細(xì)菌不產(chǎn)生淀粉酶。
(三)氯化氫酶的定性測定
1．將配備的枯草桿菌和大腸桿菌斜面各1支放在試管架上。
2．用滴管吸取過氧化氫滴加入兩管菌種斜面上，有氣泡產(chǎn)生的為接觸酶陽性(有過氧化氫酶)；無氣泡產(chǎn)生的為接觸酶陰性(無過氯化氫酶)。 |
